Дипломная работа на тему "ТЮМГУ | Влияние различных доз бромистого этидия на показатели культивирования и выход белка candida maltosa всб-829"

Работа на тему: Влияние различных доз бромистого этидия на показатели культивирования и выход белка candida maltosa всб-829
Оценка: отлично.
Оригинальность работы на момент публикации 50+% на антиплагиат.ру.
Ниже прилагаю все данные для покупки.
https://studentu24.ru/list/suppliers/Anastasiya1---1326

Описание работы

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования
"ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ"

ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ
Кафедра экологии и генетики

РЕКОМЕНДОВАНО К ЗАЩИТЕ В ГЭК

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА
бакалаврская работа
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ БРОМИСТОГО ЭТИДИЯ НА ПОКАЗАТЕЛИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫХОД БЕЛКА Candida maltosa ВСБ-829

06.03.01 Биология Профиль «Генетика»

РЕФЕРАТ
С. 46, рис. 3, табл. 6, библ. 53.
В настоящей работе освещены особенности штамма дрожжей Candida maltosa ВСБ-829 и перспективность использования их в производственных целях.
Проведен индуцированный мутагенез бромистым этидием на штамм дрожжей Candida maltosa ВСБ-829. Проведен сравнительный анализ культуральных показателей опытных и контрольной групп дрожжей Candida maltosa ВСБ-829: по показателю выживаемости - среди 32 вариантов культур; по скорости роста - среди 80 клонов; по продукции белка - среди 79 клонов. Установлено, при каких концентрациях бромистого этидия, подействовавших на Candida maltosa, повышаются средние показатели по данным культуральным свойствам. Выявлены клоны, которые под действием определенной концентрации бромистого этидия, превзошли показатели контрольных вариантов по скорости роста и продукции белка.
Ключевые слова: Candida maltosa ВСБ-829, бромистый этидий, мутагенез,-- скорость роста, продукция белка.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1.1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА CANDIDA И
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ 8
1.1.2. ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДРОЖЖЕЙ В ПРОМЫШJIЕI-П-IОСТИ 1О
1.1.3. ЦЕIП-IЫЕ КАЧЕСТВА ДРОЖЖЕЙ 11
1.1.4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДРОЖЖЕЙ В КАЧЕСТВЕ КОРМОВЫХ ДОБАВОК 13
.... 1.1.5. ОСОБЕI-П-IОСТИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ CANDIDA МALTOSA 16
1.2. МУТАГЕI-П-IЫЕ СВОЙСТВА ЭТИДИУМА БРОМИДА 18
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 22
2.1. ПРИГОТОВJIЕНИЕ ППС 22
L 2.2. ПОСЕВ МИКРООРГАНИЗМОВ 22
2.3. ХАРАКТЕРИСТИКА CANDIDA МALTOSA ВСБ-829 22
2.4. МУТАГЕI-П-IОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ БРОМИСТОГО ЭТИДИЯ НА ШТАММ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA МALTOSA ВСБ-829 23
2.5. УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ CANDIDA МALTOSA ВСБ-829 24
2.6. ИЗМЕРЕНИЕ ОПТИЧЕСКОЙ ПЛОТНОСТИ У КЛОНОВ CANDIDA МALTOSA ВСБ-829 24
2.7. ВЫДЕJIЕНИЕ СУММАРНОГО БЕЛКА ИЗ КУЛЬТУР 25
2.8. ОПРЕДЕJIЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА У КЛОНОВ CANDIDA МALTOSA ВСБ-829 МЕТОДОМ БРЕДФОРДА 25
2.9. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ДАIШЫХ 26
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 27
3.2. АНАЛИЗ СКОРОСТИ РОСТА КЛОНОВ CANDIDA МALTOSA,
ПОКАЗАТЕЛИ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА 33
3.4. ВЫЯВЛЕНИЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ КЛОНОВ CANDIDA МALTOSA ВСБ-
L- 829, ВОЗНИКШИХ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ БРОМИСТОГО ЭТИДИЯ, ПО
ПОКАЗАТЕJПО СКОРОСТИ РОСТА 36
3.5. ВЫЯВЛЕНИЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ КЛОНОВ CANDIDA МALTOSA ВСБ- 829, ВОЗНИКШИХ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ БРОМИСТОГО ЭТИДИЯ, ПО ПОКАЗАТЕJПО ПРОДУКЦИИ БЕЛКА 36
L выводы 38
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 39

ВВЕДЕНИЕ
Все жизненные процессы организма животных и птицы напрямую зависят от синтеза и функционирования белка в организме. Он является непосредственным и основным участником биохимических реакций в организме, запуская процесс метаболизма. К настоящему моменту в кормах сельскохозяйственных животных обнаруживается крайне критичная нехватка белка. В то ж время микробная биомасса отличается неповторим содержанием аминокислот, превышающих содержание во всех животных и растительных видах кормовых добавок. Содержание сухой части веществ в клетках дрожжей может достигать до 2/3 от массы клетки, включая белки и аминокислоты. Включение микробных добавок в рацион животных и птицы способствует приросту массы тела и увеличивает суммарное содержание заменимых и незаменимых аминокислот.
Производители, ведущие интенсивное животноводство, зная все ценные качества микробных добавок, включают их в рационы сельскохозяйственных животных и птицы, что позволяет повысить их продуктивность и предотвратить развитие различных заболеваний. Микробные добавки не позволяют развиться заболеваниям, вызванным патогенными вирусами. Кроме того, они приводят в норму работу желудочно-кишечного тракта, благодаря их ферментной активности.
Приоритетнее использовать в качестве кормовой добавки дрожжи среди прочих микроорганизмов по ряду причин. Дрожжи не избирательны к субстрату, растут на многих видах сред. При этом, имеют самую высокую продуктивность в группе микроорганизмов. Важно отметить их устойчивость к патогенной микрофлоре, удобство отделения больших клеток от культуральной жидкости, а отсутствие спор сохраняет экологическую чистоту [Дрожжи в современной биотехнологии, №1, с. 26-27], [Определение кинетических параметров ... , №2, с. 204-205].
Штамм Candida maltosa ВСБ-829 (ВКПМ У-2043), полученный из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП
«ГосНИИ:генетика», эффективно используется для производства кормового белка. По последним исследованиям показано, что включение дрожжевого белка Candida maltosa в рацион питания цыплят-бройлеров и телят способствует
1 повышению неспецифической резистентности к инфекционным заболеваниям.
Доказано, что использование микробных добавок на основе Candida maltosa
способствует приросту массы тела птицы и увеличивает суммарное содержание заменимых и незаменимых аминокислот. Все ранее упомянутое делает его перспективным объектом для использования в животноводстве и птицеводстве. Но в настоящее время производственные возможности внедрения микробных добавок на основе дрожжей Candida maltosa ограничены из-за того, что данный штамм не обладает продуктивностью, позволяющей получать большие объемы биомасс. В связи с этим проводятся работы по увеличению продуктивности промышленных штаммов-продуцентов, следуя молекулярной стратегии: сайт направленным мутагенезом, использованием протопластов, рекомбинантных штаммов. Но эффекты от других методов не были проверены в полной мере, например, индуцированного химического мутагенеза, использования стимулирующего действия биологически активных веществ. Важно отметить,
что данные методы отличаются недорогой ценой, простотой, но в то же время
значительным эффектом, поэтому особенно привлекательны в использовании.
Актуально испытать действие генетически активных соединений на дрожжах, что не проводилось раннее [Эффективность использования фосфемида ... , т. 4, с.
69-76].
Таким образом, приоритетно расширить круг видов микроорганизмов, биомассу которых можно использощ ть в качестве дешевого заменителя соевого или животного белка, включаемого в корма сельскохозяйственных животных и птицы.
Целью настоящей работы явилось изучение влияния различных доз бромистого этидия на показатели культивирования и выход белка Candida maltosa ВСБ-829.
Для реализации цели были поставлены следующие задачи:
1. Проанализировать выживаемость штамма дрожжей Candida maltosa ВСБ- 829, подвергнутого действию бромистого этидия в разных концентрациях.
2. Оценить влияние различных доз бромистого этидия на скорость роста
Candida maltosa ВСБ-829 и выход суммарного белка.
3. Выявить наиболее перспективные мутантные клоны, обладающие высокими показателями скорости роста и/или продукции белка.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Bradford М. М. А rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye Ьinding. Anal. Biochem., 1976. V. 72. 248-254 р.
2. Candida maltosa used for the Ьio-degradation of petroleum product pollutans.
United States Patent 6444204.
3. Clements М. Stress, disease and nutritional solutions in poultry production. Poultry Intemational, 2011. Vol. 50. №1. 22-25 р.
4. Herich R., Levcut М. Lactic acid bacteria, proЬiotics and immune system. Vet. Med, 2002. №47(6). 169-180 р.
5. Laukova D., Valik L., Gorner F. Effect oflactic acid on the growth dynamics of
Candida maltose УР1. Czech J. Food Sci. Vol. 21. 43-49 р.
6. Rost Agro. Чем хороши кормовые дрожжи?: [сайт]. 2010.
7. Аллаберганова З.С. Изучение биологических свойств некоторых видов дрожжеподобных грибов рода Candida. Ургенч: Ургенчский филиал Ташкентской медицинской академии. 1 с.
8. Барановский С.Ф., Болотин П.А., Евстигнеев М.П., Чернышев Д.Н. Взаимодействие бромистого этидия и кофеина с ДНК в водном растворе. Севастополь: Журнал прикладной спектроскопии, 2009. Т. 76 №1. 144 с.
9. Биопрепарат на основе штамма Lactobacillus plantarum 1-211 для
животноводства. Сообщение. Кормление бройлеров/ В. И. Фисиню-i, Е. Н. Андрианова, И. И. Чеботарев [и др.]. Сельскохозяйственная биология, 2017. т. 52. № 2. 382-390 с.
1О.Влияние кормовой добавки Candida maltosa на скорость роста и аминокислотный состав мышечной ткани у цыплят-бройлеров / Р.Д. Рустамов, О.В. Трофимов, Д.С. Шапенова, Н.Ю. Третьяков, И.В. Пак. Тюмень: ФГАОУ Тюменский государственный университет. Актуальные
вопросы ветеринарной биологии №1 (45), 2020. 43-46 с.
11. Влияние пробиотиков на основе Saccharomyces sp. и Bacillus subtilis на бактериальное сообщество слепых отростков кишечника и продуктивность цыплят бройлеров / Т.А. Егорова, Т.Н. Ленкова, Л.А. Ильина [и др.]. ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства. Сельскохозяйственная биология,
2016. т. 51. №6. 891-902 с.
12. Влияние флавинмононуклеотида на взаимодействие в системе бромистый этидий-ДНК/ А.А. Герус, А.В. Фомин, Н.А. Гладковская [идр.]. Харьков: Бiофiзичний вiсник, 2014. Вип. 32(2). 6-7 с.
13. Говорунова В.А., Говорунов И.Г., Фирстова В.В., Зырина Е.В. Исследование взаимодействия бромистого этидия с клетками бактерий рода Yersinia в лиофилизированных/регидратированных препаратах. ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», п. Оболенск. Проблемы особо опасных инфекций, 2012. вып. 111. 54-56 с.
14. Дрожжи в современной биотехнологии/ Т.Е. Банницына, А.В. Канарский, А.В. Щербаков [и др.]. Казань: Вестник Международной академии холода, 2016. №1. 25-28 с.
15. Дрожжи как основа биологически активных кормовых добавок про- и пребиотического действия/ А.Г. Лобанок, Л.И. Сапунова, А.Н. Шарейко, Е.А. Долженкова. Минск: Весцi нацыянальнай акадэмii навук Беларусi №1, 2014. 17-21 с.
16. Егоров И.А. Современные подходы к кормлению птицы. Птицеводство, 2014. №4. 11-16 с.
17. Ермак Е.Л., Круглова Е.Б., Пальчиковская Л.И., Алексеева И.В. Спектрофотометрическое иссл дование механизмов связывания аналогов
цитидина и бромистого этидия с ДНК. Харьков: Бiополiмери i клiтина, 2007. т. 23. №6. 529-536 с.
18. Жирякова М.В., Изумрудов В.А. Преимущества и перспективы
флуоресцентного метода исследования полиэлектролитных комплексов ДНК, основанного на конкурентном вытеснении интеркалированного
красителя. Москва: Московский государственный университет имю М.В. ломоносова. Высокомолекулярные соединения, 2007. Серия А. Т. 49. №12. 2092-2106 с.
19. Зипаев Д.В., Зимичев А.В. Молочная сыворотка - ценное сырье для вторичной переработки. Самара: Известия вузов. Пищевая технология, 2007. №2. 14-16 с.
20. Игнатовец О.С., Ахрамович Т.И., Леонтьев В.Н. Роль цитохром Р-450- зависимых монооксигеназных ферментных систем бактерий рода Pseudomonas в биотрансформации и биодеградации ксенобиотиков. Труды БГТУ. Серия 2: Химические технологии, биотехнология, геоэкология, 2009. 174-177 с.
21. Ильин, Д. Ю., Ильина Г. В. Основы биотехнологии переработки сельскохозяйственной продукции: Учебное пособие для студентов технологического факультета направления подготовки 35.03.07
«Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции». Пенза: ФГБОУ ВО Пензенская ГСХА. Пензенский государственный аграрный университет, 2016. 115 с.
22. Иммунный статус телят под влиянием пробиотика Провагена / Е. В. Крапивина, Д. В. Иванов, А. И. Феськов [и др.]. ФГБОУ ВПО Брянская государственная сельскохозяйственная академия. Сельскохозяйственная биология. 2012. № 4. 78-82 с.
23. Исследование комплексообразования бромистого этидия с ДНК методом спектроскопии комбинационного рассеяния света / Ю.Н. Близнюк, Т.В. Больбух, Е.Б. Круглова [и др.]. Харьков: Бiополiмери i клiтина, 2009. Т. 25. №2. 126-129 с.
24. Калошина Е., Алсултанов Т, Токарь Н. Получение добавки на основе вторичного сырья. Комбикорма, 2006. №7. 47-48 с.
25. Капустина О.А., Карташова О.Л. Факторы патогенности грибов рода Candida и возможность их регуляции эфирными маслами. Оренбург: Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН, 2013. №1. 10 с.
26. Капустина О.А., Логачева Л.Е., Карташова О.Л. Видовой состав и биологические свойства грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека. Оренбург: Известия Оренбургского
государственного аграрного университета. 2009. №4 (24). 179-181 с.
27.Козлов А. И. Кормовые дрожжи из непищевого сырья и эффективность применения их в животноводстве/ А.И. Козлов. - М.: ЦБНТИ,
28. Курбанов А.И. Влияние антиоксидантов на фагоцитоз Candida. Баку: Проблемы медицинской микологии, 2008. Т.10. №4. 29-32 с.
29. Курбанов М.Т., Бешимов Ю.С., Акрамова О.К. Использование пивоваренных дрожжей в кормовых целях. Курск: Современные технологии продуктов питания. Сборник научных статей международной научно-практической конференции от 05.2014, 2014. 115-117 с.
30. Лавриненко А.В., Азиов И.С., Колесническо С.И. Использование методов maldi-for масс-спектрометрии и питательной среде chromagarcandida для идентификации грибов Candida. Караганда: Успехи медицинской микологии,2016. Т.15. 74-75 с.
31. Левончук Е.А. Кандидозы слизистых оболочек полости рта. Современная стоматология. 2006. №3. 27-31.
32. Мозжерова М.А. Виды дрожжевых грибов рода Candida в изолятах из полости рта у ВИЧ-инфицированных пациентов Брянской области. Брянск: ЗНиСО, 2019. 58 с.
33. Мороз А.Ф. Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам. Москва: Российская академия медицинских наук НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи РАМН, 2009. 60 с.
34. Мулюкова Э. Ф., Андреева А. В. Биохимические и иммунологические показатели крови цыплят-бройлеров на фоне вакцинации и при использовании пробиотика «Ветоспорин-С» в сочетании с кормовой добавкой «Витамэлам». Уфа: Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана, 2015. 155-158 с.
35. Определение кинетических параметров роста и зависимости окислительной активности от негативных факторов внешней среды у дрожжевых штаммов Candida maltosa и Debaryomyces hansinii / В.А. Арляпов, С.С. Каманин, Н.Ю. Юдина, В.А. Алферов. Тула: Известия
- Тульского государственного университета. Естественные науки, 2009. №2.
204-205 с.
36. Оценка адгезивной способности и чувствительности к антифунгальным препаратам грибков рода Candida в контексте источника изоляции/ Ю.С. Хомич, А.Л. Бурмистрова, Н.Е. Самышкина [и др.]. Успехи современного естествознания. 2006. №4. 105-107 с.
37. Пастухов Д.М. Особенности влияния Candida spp. на бактерии полости рта. Пермь: Международный студенческий научный вестник, 2018. №1. 31 с.
38. Пескова Е.Б. Особенности окислительного обмена дрожжей Candida maltosa при росте на алифатических спиртах. Автореферат диссертации. Москва: [б. и.], 1996. 20 с.
39. Рабинович Ю.С. Исследование естественных механизмов регулирования роста популяции дрожжей Candida maltosa при периодическом культивировании. Автореферат диссертации Санкт-Петербург: [б.и.], 1997, 20 с.
40. Результаты сравнительного анализа мутагенной активности флуоресцентных красителей ДНК бромистого этидия и SYВR GOLD / И.А. Хитрово, К.И. Кирсанов, Е.А. Лесовая [и др.]. Москва: Вестник РОIЩ им.
41. Роль свеклосахарного производства в развитии отраслей АПК / М.Н. Егорова, Л.Н. Пузанова, А.А. Колотовченко [и др.]. Курск: Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии, 201О. 48-51 с.
42. Рустамов Р.Д., Трофимов О.В., Пак И.В. Оценка влияния дрожжевой добавки на показатели иммунологического статуса сельскохозяйственных животных. Тюмень: Актуальные вопросы ветеринарной биологии №3 (43), 2019. 19-23 с.
43. Сахарук Н.А. Микробная флора полости рта в норме и патологии. Морфология грибов рода Candida. Витебск: Вестник ВГМУ, 2008. Т.7. №2. 10 с.
44. Скиба Е.А. Биосинтез кормовых дрожжей на средах, полученных из плодовых оболочек овса. Бийск: Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология, 2016. Т.6. №3. 140-142 с.
45. Смирнова Л. В., Субботин С. В., Хоштария Е. Е. Применение дрожжевого пробиотика в рационах молочных коров. Вологда: Молочнохозяйственный вестник, 2014. №2(14). 36-40 с.
46. Филина Ю.С. Характеристика грибов рода Candida, выявляемых у ВИЧ инфицированных пациентов. Москва: ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, 2018. 11-12 с.
47. Филичкин С.Е., Федосеев А.В. Грибки рода Candida в полости рта.
Смоленск: Вестник Смоленской медицинской академии, 2010. 107 с.
48. Хохлачева А.А. Кандидатская диссертация. Кефирные грибки как ассоциативная культура микроорганизмов. М. [б.и.], 2015. 67 с.
49. Храмцов А.Г. Феномен молочной сыворотки: монография. Санкт Петербург: Профессия, 2011. 802 с.
50. Шебашова Н.В., Клеменова И"А, Резайкин А.В. Видовое разнообразие грибов рода Candida при микозах кожи и онихомикозах. Нижний Новгород: Вестник дерматологии венерологии, 2009. 81-84 с.
51. Шилова Н.К. Биохимические закономерности роста дрожжей Candida среде кислорода. Автореферат диссертации. Академия наук Республики Казахстан, 1992. 20 с.
52. Экзополимеры микроорганизмов в утилизации гидрофобных субстратов/ В.В. Дмитриев, Т.Г. Русакова, В.В. Рогачевский [и др.]. Тула: Известия Тульского государственного университета. Естественные науки, 2012. 271- 284 с.
53. Эффективность использования фосфемида для повышения продуктивности штамма Candida maltosa ТМ-12 / И.В. Пак, О.В. Трофимов, Л.И. Вайсфельд, Р.Д. Рустамов, К.В. Скворцова. Тюмень: Вестник Тюменского государственного университета. Экология и природопользование, 2018. Т. 4, №3. 69-76 с.